12年前，33岁的朱女士利用试管婴儿技术成功生下一名男孩，多余的11个胚胎被冷冻储藏了起来。受益于全面二孩政策的实施，其中的一枚在熬过了漫长的“冻龄”阶段后，将成功分娩。

广州医科大学附属第三医院生殖医学中心成功将3枚冷存12年胚胎解冻复苏，并植入产妇体内。在经历了减胎等程序后，已45岁高龄的朱女士已成功怀孕12周。

据悉，冷冻如此长时间后复苏、植入，该“冻龄”宝宝将有望成为国内冷冻时间最长（12年）的“冰宝宝”。

医生在电子显微镜下观察即将冷冻储藏的受精卵胚胎。

12年前获得13个有效健康胚胎

医院生殖医学中心副主任医师许海燕介绍，来自罗定的朱女士，因为双侧输卵管堵塞，婚后多年不育。2004年3月，曾在广医三院接受过试管婴技术操作，同年12月成功诞生一个健康男婴。当年，朱女士一共取得19个健康卵子细胞。在与其丈夫的精子结合后，获得了13个有效健康的胚胎。“当时植入了两个胚胎，成功生下男孩后，朱女士剩余的11个健康胚胎被冷冻保存了起来”，许海燕介绍，和当时许多已经成功分娩的试管婴操作夫妻一样，朱女士成功有了一个孩子后，对于剩下的11个封存胚胎没有太过留意。

全面二孩政策后，许多被当初父母遗忘的小胚胎，纷纷被回想起来，被大量地解冻、复苏，植入母体。今年3月，45岁的朱女士，决定尝试生育二孩。万幸的是，在没有缴费保存的情况下，医院一直为这11个小生命提供冷冻保存服务。这些“小家伙”依然静静地呆在零下200多摄氏度的液氮罐中，等待复苏的机会。随后，朱女士主动续缴了积欠的105个月保管费用。

广州医科大学第三附属医院辅助生殖技术实验室里的冷冻仓存放室，医生在冷冻储存容器里舀出低温液氮。

7个冷冻胚胎3个符合植入要求

根据基本信息，中心医护人员成功找到了朱女士当时冻存的“胚胎”，用复苏技术为冷冻胚胎注水、唤醒。通过显微镜、肉眼来观察复苏胚胎的形态，并据此甄别胚胎的健康程度。“所取的7个胚胎中，有3个形态饱满、正常，符合植入的相关要求。”

许海燕表示，广医三院从2001年开始提供冷冻胚胎相关的保存服务。在21世纪初期，生殖医学领域还没有发现玻璃化冷冻技术时，所采取的是机械程式化冷冻方式。统计显示，在使用老旧脱水、冷冻方法时，其解冻复苏的成功率约为60%.在澳洲专家发明玻璃化冷冻技术，能够在短短数秒时间内完成胚胎、生殖细胞的快速冷冻后，相关的复苏成功率则达到95%以上。

“目前，我们中心每月进行的约600个周期的胚胎植入中，完全适用新鲜胚胎进行植入只有200例左右。使用冷冻胚胎植入的冰宝宝则达到300-400例，每月解冻的冰宝宝数就有近千个。冷冻胚胎植入后的成功抱婴回家率，和新鲜胚胎并没太大差异。”

医生在电子显微镜下观察即将冷冻储藏的受精卵胚胎。

考虑高龄因素三胞胎减至一胎

获得了三个唤醒的胚胎后，许海燕很快安排了为朱女士进行胚胎植入手术。术后15天左右的观察，三个12年前的胚胎依然保持着旺盛的生命力，全部存活。朱女士已是45岁的高龄，成了此次二孩分娩的最大障碍。“从优生优育的角度来看，女性怀孕的年龄越大，胚胎异常发生的几率就越大，而且怀孕后流产率高，承担着非常大的风险。”

许海燕在历次门诊随访中，都建议患者减胎。朱女士也不想在如此高龄，承担三倍于常规怀孕的压力，选择将三胞胎减少到一胎。6月8日进行了减胎操作，13日又进行了减胎手术后的多次影像观察。“这次手术进行的非常成功，由于患者使用的是12年前更为年轻、活力的冷冻胚胎，本身发生染色体异常的几率就要低许多。再考虑到患者目前已经过了流产高风险期，朱女士这次成功分娩二孩的几率很高”，医院产前诊断专家陈敏表示，这也意味着大约六个月后，朱女士将有可能分娩我国冻存时间最长的一个冰宝宝。

揭秘

胚胎冰冻及受孕过程

第一步 取卵

目前的促排卵药物对人体的内分泌机制分析已经很透彻了，即便刚刚来过例假，也可以马上进行药物促排卵，从使用药物的10-12天开始，便可以使用微创技术进行取卵，一般取出数量为10个左右。

第二步 卵泡清洗和去除颗粒

查看卵子的成熟程度，去除颗粒细胞后便于用来保护卵子的保护剂进入细胞。

第三步 精子处理

从提取的丈夫一方精子中，使用显微观察，捕捉到形态最好，最具活力的一只“蝌蚪”予以逮捕。用针头吸入针管。

第四步 卵子单精子注射

将捕捉到的活跃精子，注射入卵子当中，完成体外人工辅助生殖操作。

医生在电子显微镜下对卵子进行第二代人工受精。

第五步 受精卵及胚胎培养

完成受精后，在特定环境下进行胚胎培养3-5天，考虑到细胞分裂的时间、速度，一般在第三天时，最初的单一受精卵大约分裂为8个细胞。随后进入快速分裂期，细胞数呈集合级数增长。到了第5天时，已经发育成有2的N次方个细胞后，即为合格胚胎。

医生在显微镜下对将要进行冷冻的受精卵胚胎进行处理液浸泡的预处理。

医生将已放入受精卵胚胎的载管放入液氮中预冷却。

第六步 胚胎玻璃化冷冻

分梯度由低到高使用对应浓度、渗透压的药剂进行脱水，全部脱水冷冻过程仅需5分钟时间。

第七步 液氮罐冷冻保存

将脱水胚胎放置在零下196℃的液氮罐子里进行冷冻保存。原则上可以无限期保存，前提是温度一直处于零下196℃。

广医三院辅助生殖技术实验室里的冷冻仓存放室，冷冻储存容器里的载管。

第八步 胚胎解冻

当需要使用胚胎时，从液化氮中取出胚胎，分梯度使用药剂，按照由高到低使用对应浓度、渗透压的药剂进行复原，全部过程可以快速完成。

第九步 胚胎植入

选取合适胚胎，植入到女性宫腔内。15天后，进行验孕操作，判断是否成功怀上孩子。

释疑

冰封12年“冰宝宝”健康吗？

在接近绝对零度的极低温度下待了这么长时间，冰宝宝的健康状况，是否会比新鲜胚胎要差些呢？目前国际、国内的相关研究还在进行，毕竟试管婴技术从1978年才面世，迄今不到40年。使用冷冻胚胎进行操作的相关技术，开展的时间更短。截至目前，医学界还没有发现使用冷冻胚胎的冰宝宝在成长过程中，在智力、发育等领域会表现出与新鲜胚胎上的差异。如同试管婴儿技术孕育的孩子，并不比普通孩子更笨、更弱一样。

不仅如此，由于冷冻胚胎的形成时间，往往处于父母更年轻的时段，其发生遗传变异的可能性反而更低。如果一名女性在30岁前取出卵细胞进行受精，然后将胚胎进行冷冻保存。在35岁后再移植怀孕，那么，这个来自于30岁身体的卵细胞，极可能会比高龄时发育的卵细胞缺陷率低。

许海燕主任表示，女性年龄越大，异常卵子产生的比例越高，胚胎异常比例及畸形胎率也就越高，流产的比例也相当大。以朱女士为例，其33岁时冻存的胚胎，发生唐氏综合征等染色体异常疾病的风险极低，但如果是45岁再来取卵做胚胎，其发生染色体异常的风险则高达80%以上。年轻时的冷冻胚胎较高龄时获得的新鲜胚胎大多数质量会好一些。

电子显微镜下即将冷冻储藏的受精卵胚胎。

揭秘

“唤醒”冷冻胚胎在模拟人体环境待4小时

随着近期发明应用的玻璃化冷冻技术的发展，胚胎快速冷冻、解冻成功率已大大提升。广州医科大学第三附属医院生殖助孕中心实验室杜红姿主任表示，胚胎的冷冻，关键是脱水和注水的相关细节需要处理好。构成细小胚胎的内容物中，除了各类生命物质，其余最主要的就是水，它们在冷冻卵子的过程中，成了最需要克服的瓶颈。

对胚胎进行脱水冷冻，先将其放置到细胞培养液和专业器皿中30分钟左右，随后一种脱水试剂“上场”。这种试剂已被证实，在脱水过程中对胚胎的安全危害性极小。

先用浓度低、渗透压低的试剂，胚胎开始快速脱水；再上浓度高、渗透压力高的试剂，让脱水过程可控，保留一定水分。随后，在1秒钟内让脱水后的胚胎由室温降低到零下196℃。细胞内的液体不再是冰晶，而是玻璃化的固态物质，对胚胎的损害也就降到较低水平。而让冷冻胚胎快速复活的过程，则是将上述昂贵试剂的浓度由高向低进行反向操作。随后，生殖医学专家将这些复苏的胚胎，放置在37℃、二氧化碳浓度6%、湿度95%以上的培养液中待上4个小时。在模拟出来的人体环境待上足够长时间后，感觉回到熟悉环境的胚胎才终于“满血复活”。之后，能否成功分娩出试管婴儿，就要看胚胎质量、生殖系统状况等因素了。

知多D

国外有冻龄16年的冰宝宝

冷冻胚胎和生殖细胞精子、卵子的技术，最早是为了满足畜牧业对珍稀动物的保护和配种用途。它真正第一次应用于人工辅助生殖技术，是1986年的事情。其中尤以卵子细胞冷冻、解冻最为复杂，当时澳大利亚专家第一次复苏了冷冻卵子，并成功形成胚胎、受孕，最后诞生了第一个被称为“冰宝宝”（又被称为“时光婴儿”）的通过冰冻卵子孕育的试管婴儿。

当时的专家发现，冻卵的复苏率很低，做试管婴儿时的成功率也远低于新鲜卵子。直到发明快速脱水和极速冷冻方法，卵子冷冻复苏问题才得到有效解决 ，也带动了胚胎冷冻复苏的成功率提高。广医三院生殖医学中心主任刘见桥表示，根据检索，此前中国冻龄最长的一位冰宝宝，是去年青岛为一名47岁患者植入的冻龄10年的胚胎。而在英国、澳大利亚等国家和地区，冻龄超过16年的冰宝宝也时有出现。

南都科学新闻工作室 出品

主持：陈养凯

采写：南都记者王道斌 通讯员 黄贤君 白恬

摄影：南都记者 谭庆驹